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      操作高效液相色譜儀的10個注意事項

      發布時間:2021-07-19

                
          我們在科學實驗中使用的高效液相色譜儀操作過程中難免會出現錯誤,有時候會比較粗心大意,在不正確的儀器操作中可能會出現錯誤的結果,以下是為大家提供的十種注意事項。


      1. 使用特定的高效液相色譜儀板
      使用高效液相色譜儀板代替傳統的液相色譜儀板。你為什么問?因為高效液相色譜儀在吸附劑質量、板制造的一致性、板開發程序、檢測(衍生)試劑的應用、掃描程序和樣品應用設備方面的發展蓬勃發展。高效液相色譜儀板具有更薄的層,并使用較小的二氧化硅顆粒 (?10 μm) 制成。此外,該板上的粒度分布比傳統 TLC 板的粒度分布更窄。因此,高效液相色譜儀板具有單位距離分辨率更高、顯影更快和溶劑系統消耗更少等優點。


      2. 處理注射器時不要粗心
      高效液相色譜儀注射器是一項成本高昂的業務。處理這些時總是要小心。將樣品裝入注射器(手動),并檢查是否有氣泡(注射器中的氣泡意味著裝入了錯誤的體積,導致誤報)。如果有任何氣泡,只需將注射器保持直立位置并清除其中的氣泡。


      3. 確保樣品正確溶解
      在制備高效液相色譜儀樣品/標準品時,請確保您使用的溶劑能夠完全溶解樣品(完全溶解的樣品會與溶劑形成均勻的混合物,沒有任何明顯的沉淀物)。此外,始終通過 0.22 μm 注射器過濾器過濾樣品,以去除可能堵塞高效液相色譜儀注射器的任何粗顆粒/沉淀物。


      4. 使用前一定要激活板
      二氧化硅具有吸濕性,因此高效液相色譜儀板在暴露于空氣中時會吸水。通過在烤箱中加熱以除去水來激活硅膠板。
      如果沒有激活就使用板怎么辦?根據您的化合物和/或溶劑系統的性質,您的結果可能會以多種方式受到影響。例如,如果化合物是極性的,它可能會與硅膠保持緊密結合并影響其 Rf 值。此外,如果溶劑系統是高度非極性的,它可能無法正確滲透二氧化硅,最終影響樣品的移動(注意:請勿觸摸板表面,以免皮膚上的油脂或污垢殘留在板上. 受污染的板可能會在掃描過程中導致錯誤信號。要么將板固定在邊緣,要么使用干凈的鑷子)。


      5. 不要心不在焉地裝盤
      自動進樣器在其平臺上標有 X 軸和 Y 軸。將板與這些軸對齊,以便樣品帶應用發生在 X 軸上并沿 Y 軸運行。


      6. 保持條帶的位置和寬度不變
      特定化合物的譜帶位置決定了最終的 Rf 值。因此,要每次都獲得恒定的 Rf,請確保不要從 X 軸和 Y 軸更改示例應用程序的方向。此外,樣品譜帶應用的寬度必須保持恒定,因為它是譜帶強度的直接量度,因此也是化合物數量的量度。所有這些信息都將輸入到控制高效液相色譜儀自動進樣器的計算機軟件中。


      7.確保在跑步后正確擦干盤子
      一旦板在其各自的溶劑系統中運行,在浸入衍生劑之前始終將其干燥,因為當板浸入衍生劑時,濕帶中的化合物會溶解。風干板非常耗時,因此我們使用吹風機在運行后快速干燥板。


      8. 開發板時要小心
      不要將板浸入衍生劑中的時間過長,因為這會導致化合物在溶液中溶解。我們通常浸幾秒鐘,這足以讓盤子完全浸濕。


      9.不要改變烤箱的加熱時間和溫度
      您可能會遇到無法通過肉眼或掃描儀檢測到的化合物。例如,糖需要通過浸入在水中制備的硫酸溶液中然后加熱來燒焦。加熱的量和時間極大地影響條帶的強度。因此,每次分析給定化合物時,請保持時間和熱量恒定。


      10. 不要使用熱板進行高效液相色譜儀
      您可以使用熱板來開發液相色譜儀板,因為它不是定量分析。但是對于高效液相色譜儀,您需要確保熱量分布均勻。熱板無法均勻分布熱量,樣品的某些條帶將在較高溫度下加熱,因此掃描儀記錄的響應強度會更高。此外,雖然不太可能,但如果板在其長度上有任何彎曲/曲線,它可能不會與熱板表面均勻接觸,從而導致局部加熱區域。相反,要么使用高效液相色譜儀板式加熱器,要么使用溫度可控的烤箱。確保在整個實驗過程中使用相同的加熱模式,以確保結果的準確性和重現性。

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